精品久久久久久无码中文野结衣,久久99亚洲超碰,在线观看亚洲精品国产,国产精品一区二区久久久蜜桃

技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 牛I型膠原(Col I)免疫分析
牛I型膠原(Col I)免疫分析
更新時間:2015-03-10   點擊次數(shù):705次

牛I型膠原(Col I)免疫分析

本試劑盒僅供研究使用。

使用目的:本牛I型膠原Col I試劑盒用于測定牛血清、血漿、或其它組織液中I型膠原(Col I)的含量。

實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中牛I型膠原(Col I)水平。用純化的抗-Col I抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入I型膠原(Col I),再與HRP標(biāo)記的I型膠原(Col I)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的I型膠原(Col I)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中牛I型膠原(Col I)濃度。 

試劑盒組成 
1 20倍濃縮洗滌液 30ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(9μg/L) 0.5ml×1瓶
3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個

標(biāo)本要求 
1.標(biāo)本采集后盡早進行實驗。血清、血漿可以直接檢測
2.組織:按相關(guān)文獻提取后,取上清液待測
3.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
4.可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:牛I型膠原Col I在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為(6μg/L ,4μg/L, 2μg/L,1μg/L, 0.5μg/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 

注意事項
1.牛I型膠原Col I試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.嚴(yán)格按說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
6.底物請避光保存。
7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。

檢測范圍:0.3μg/L– 7μg/L
規(guī)格:96人份/盒

保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

 

化工儀器網(wǎng)

推薦收藏該企業(yè)網(wǎng)站
类乌齐县| 曲沃县| 都匀市| 尉犁县| 浦江县| 高碑店市| 闽清县| 沛县| 万州区| 赤峰市| 台中市| 五常市| 庆云县| 萝北县| 收藏| 湾仔区| 班玛县| 杨浦区| 商南县| 南通市| 巩留县| 时尚| 合川市| 上思县| 天全县| 凉城县| 郧西县| 南昌县| 深泽县| 弋阳县| 个旧市| 岱山县| 泾源县| 团风县| 平和县| 若羌县| 杭锦后旗| 大同县| 尤溪县| 和静县| 泽库县|