細(xì)胞培養(yǎng)基傳代轉(zhuǎn)讓方法及分析色譜技術(shù)
細(xì)胞培養(yǎng)基傳代轉(zhuǎn)讓方法:
(1) 、細(xì)胞培養(yǎng)基試驗(yàn)準(zhǔn)備:200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),酒精棉球,廢液缸,試管架,微量移液器,記號筆,培養(yǎng)皿,離心管。
(2) 、棄掉培養(yǎng)基皿中的培養(yǎng)基,用1ml的PBS溶液洗滌兩次。
(3) 、用Tip頭加入1ml Trypsin液,消化1分鐘(37。C,5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁,觀察到細(xì)胞*從壁上脫落下來為止。
(4) 、加入1ml的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
(5) 、用Tip頭多次吹吸,使細(xì)胞*分散開。
(6) 、將培養(yǎng)液裝入離心管中,1000rpm離心5min。
(7) 、用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇0.8X106個(gè)細(xì)胞加入一個(gè)35mm培養(yǎng)皿。
(8) 、將合適體積*培養(yǎng)液加入離心管中,混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中,使其均勻分布。
(9) 、將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),第二天轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞培養(yǎng)基分析色譜是制備色譜的基礎(chǔ)。當(dāng)我們在分析色譜上取得了良好的分離效果時(shí),可以將其放大,應(yīng)用到制備色譜上,由此,我們需要考慮調(diào)整上樣量,流速,梯度。
1、上樣量的調(diào)整:他與分析色譜柱和制備色譜柱的柱長和柱內(nèi)徑有關(guān):
具體關(guān)系時(shí);制備柱上樣量/分析柱上樣量=制備豬場/分析柱長*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方。
2、流速的調(diào)整:
制備柱流速/分析柱流速=制備柱體積/分析柱體積=制備柱長/分析柱長*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方。
3、梯度的調(diào)整:
制備柱梯度/分析柱梯度=制備柱體積/分析柱體積*制備柱流速/分析柱流速。